琼海血清、培养基-来自中国的制造、工厂、供应商

今日上午，济南市乡村振兴局副局长吴金凯、副局长赵俊明，规划财务处处长付庆军，督查考核处二级主任科员王成伟一行，莅临劲牛集团考察指导工作，并对下一步业务合作方向进行全面交流座谈。劲牛集团董事长张子毅向领导考察团主要介绍了公司生物技术产业。劲牛集团是一家集科研、生产、销售为一体的国家级高新技术企业，并拥有省、市微生物工程重点实验室。产品有：培养基、动物血清、佐剂；生物试剂、微生物菌剂；生物肥料、生物饲料；益生菌、中药制品等产品。集团与中国科学院微生物研究所建立长期合作关系，成立了“微生物联合实验室”，建立了山东“微生物与绿色农业联合研发基地”。同时还与中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所、齐鲁工业大学等建立了合作关系；国际上与新西兰、澳大利亚、瑞士均建立了合作关系，集团两个子公司拥有进出口资质。集团重点投资的“有机资源再利用”项目，是响应国家绿色防控，有机肥代替化肥的战略部署，采用生物技术，对全镇畜禽废弃物、农业废弃物、污水等进行生物处理，加工成生物菌肥、生物饲料，变废为宝，从而达到修复土地，盐碱地改良，替代化肥，降低农残、重金属污染。提高农牧产业的品质及产量，实现循环农业、美丽乡村之目的。

 培养基需要在细胞培养过程中使用。有些培养基需要合成培养基和动物血清。有些细胞只有加入血清才能正常分裂。因此，动物血清也是研究人员经常使用的产品。然而，我们仍然对动物血清的识别方法、保存方法和用途知之甚少。应该如何识别？动物血清鉴别方法：血液凝固沉淀的淡黄色透明液体。如果将血液从血管中取出，放入试管中，没有抗凝剂，凝血反应会被激活，血液会迅速凝固，形成果冻。周围沉淀的淡黄色透明液体是血清，凝血后也可以通过离心获得。在凝血过程中，纤维蛋白原转化为纤维蛋白块，所以血清中没有纤维蛋白原，这与血浆不同。在凝血反应中，许多物质被释放出来，每个凝血因子都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续改变。例如，凝血酶原变成凝血酶，随着血清的储存时间逐渐减少甚至消失。这些也和血浆不一样。然而，大量未参与凝血反应的物质与血浆基本相同。为了避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析都是以血清为样品的。保存动物血清的方法：长时间保存的血清应该储存在-20。℃-70℃在低温冰箱里℃不要在冰箱里保存超过一个月。因为血清结冰时体积会增加10%左右，所以在冷冻到低温冰箱之前，血清会预留一定的体积空间，否则很容易被污染或者玻璃瓶冻裂。2.一般厂家提供的血清是无菌的，不需要过滤杀菌。如果发现血清有悬浮物，可以在培养液中加入血清一起过滤，不要直接过滤血清。

不同的细胞喜欢的环境是不一样的，血清在动物细胞培养中起着多种作用：这不仅是培养基的差异，也是细胞生长的空间密度。有些细胞生长得更好，生长得更好。这通常属于生长速度较慢的细胞。例如，内皮细胞。有些细胞数量较少，细胞状态会生长得更好，如巨噬细胞和一些肿瘤细胞。特别是巨噬细胞生长得非常快，壁贴得非常快，所以在代代相传时应该留下少量的细胞，这样细胞状态会更好。巨噬细胞更喜欢堆积生长，堆积之间有空间。如果它们生长在一起，细胞形态基本上会很差，老化会更多，这对以后的实验结果不好。因此，在培养细胞时，我们应该探索细胞喜欢的生长空间密度。①提供细胞生存和增殖所需的生长调节因素。②基础培养基中没有或多或少的营养成分。③它含有一些基质成分，可以用来粘贴壁细胞。④提供维生素、脂质、金属离子等载体蛋白。⑤在某些情况下，中和毒性物质保护细胞免受伤害。⑥为培养液提供良好的缓冲系统。⑦提供蛋白酶抑 制剂，保护细胞免受死细胞释放的蛋白酶的伤害。污染是细胞培养的大敌，预防和避免污染是成功培养细胞的关键之一。

胎牛血清是实验室中常用的自然培养基。它富含各种营养物质，但由于牛的病毒感染，也很容易携带病毒，从而给细胞培养带来潜在的干扰。因此，我们不仅要确保孕妇的来源是健康的，没有各种传染病（包括没有疯牛病流行），屠宰场需要在政府注册，在胎儿牛血清的质量检查中，还要进行各种病毒检查，以确保胎儿牛血清的质量。胎儿牛血清的批号确保生产都可以追溯。胎牛血清是在母牛怀孕5~8个月时，取出胎儿牛，心脏穿刺取血。所有的设备和网站都需要无菌。血清采集条件需要符合工业生产的标准。血清采集后，需要离心，然后留下上部，即血清，然后冷冻和储存血清。在适当的条件下，血清解冻后应一起过滤7次，滤膜孔径不断缩小，3次为0.1μm过滤。这个过滤器可以去除细菌和支原体。胎牛血清质量很好，用途广泛，适用于培养各种癌细胞株、精致细胞、原代细胞、干细胞(胚胎干细胞、间充质干细胞等)。要说为什么很多细胞培养的研究人员使用胎牛血清，那么就不得不说胎牛血清的重要作用。1.提供激素来维持细胞指数的生长，在基础培养基中没有或很少的营养，以及主要的低分子营养。2.提供组合蛋白质，可以识别维生素、脂质、金属和其它激素等，可以结合或调节其组合的物质活性。3.在某些情况下，结合蛋白质可以与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。4.是在塑料培养基质上铺展的细胞贴壁所需的因素来源。5.起到缓冲酸碱度的作用。

常用的动物血清主要包括牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清。前者来源少，价格高；后者要求新生的小牛没有母乳喂养，因为母乳喂养的小牛血清可能含有更复杂的成分。蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等是血清的主要成分。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。水解乳蛋白，胶原蛋白是另外两种较好的天然培养基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物，呈蛋黄粉状，富含氨基酸。一般配制成0.5%的溶液，略带酸性。胶原蛋白是从动物真皮中提取的，可以改善细胞表面特性，促进其附着生长。氨基酸是细胞合成蛋白的基本成分。12种氨基酸不是由细胞本身合成的，务必由培养基提供。激素包括胰岛素、生长激素和表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、增殖刺激因子等多种生长因子(MSA)，类胰岛素生长因子(IGFl，IGF2)等实验表明，大多数细胞不需要正确处理的热灭活血清。经过这种治疗的血清只对细胞生长有轻微的促进作用，或者没有作用。即使高温处理影响血清质量，细胞生长率也会降低。对于热处理后的血清，沉淀物的形成会显著增加。这些沉淀物在倒置显微镜下被观察到，如小黑点，这常常使研究人员误认为血清受到污染，并将血清置于37℃在环境中，这种沉积物会增加，使研究人员误认为这是微生物的分裂和扩增。如果没有必要，就没有必要进行热处理。它不仅节省时间，而且保证了血清的质量！

动物血清：将收集在血清分离管中的全血标本放置在室温下.5-2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清，或将上清除-20℃或-80℃但要避免反复冻融。血浆：用EDTA或者肝素作为抗凝剂采集标本，采集后30分钟内2-8℃1000×g离心15分钟，取上清检测，或将上清放在-20℃或-80℃但要避免反复冻融。组织匀浆：预冷PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液(均匀浆液中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后切割组织。切割组织与相应体积PBS(一般按1:9的重量体积比，如1g组织样品对应9mL的PBS，可根据实验需要适当调整具体体积并做好记录。PBS加入蛋白酶抑制剂入蛋白酶抑制剂)，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，均匀浆可以超声破碎或反复冻融。最后，将均匀浆液加入5万×g离心5~10分钟，取上清检测，或将上清放在-20分钟℃或-80℃但要避免反复冻融。细胞裂解液：吸弃培养液PBS（0.01M，pH7.4)再次清洗细胞。用细胞刮去细胞(胰酶和胰酶不能使用)EDTA处理)，加2-5mLPBS（0.01M，pH7.4)。悬浮细胞可以省略。收集细胞悬液，4℃1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷PBS润洗3次。加入适量的预冷PBS或非变性细胞裂解液(临用前添加蛋白酶抑制剂)重悬细胞，通常6孔板一孔的细胞量需要150-250μLPBS重悬。

胎牛血清是一种性状，外观浅黄色澄清，无溶血，无异物略粘液。胎牛血清应取自剖腹产胎牛；新牛血清取自出生后24小时内的新牛；小牛血清取自出生后10-30天的小牛。胎牛血清是高质量的，因为胎牛还没有接触到外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分至少是有害的。胎牛血清质量好质量好？胎牛血清主要通过外观(透明清亮)、总蛋白含量(胎牛血清一般范围为30-40mg/ml)、血红蛋白(不高于20mg/dl)、PH(国产血清，多高于7.5，进口胎牛血清，多低于7.5)、微生物、免疫球蛋白(进口胎牛血清，不含IgM，IgG含量也较低)、抗生素含量等。胎牛血清的作用：胎牛血清在包括：1.为维持细胞指数生长提供激素，基础培养基中无或少量营养物质和主要低分子营养物质。2.提供能够识别维生素、脂类、金属和其他激素的结合蛋白，并能够结合或调节它们的物质活力。3.在某些情况下，蛋白质可以与有毒金属和热原质结合起来解毒。4.它是塑料培养基质所需的因素来源，用细胞贴壁铺展。5.起酸碱缓冲液的作用。6.提供蛋白酶抑制剂，使剩余胰蛋白酶在细胞代代相传时失活，保护细胞免受伤害。胎牛血清用于哺乳动物细胞培养；因此，胎牛血清被广泛使用。例如，胎牛血清可用于科研、工业生产、人兽疫苗生产和生物技术药物的质量控制。胎牛血清是实验室常用的天然培养基。它营养丰富，但由于母牛的病毒感染，也容易携带病毒，给细胞培养带来潜在干扰。

在细胞培养中，血清是zui的重要组成部分。实验操作中应注意及处理方法：保存血清：建议保存血清-5。℃至-2O℃。但是，如果存放在4℃不要超过一个月。如果一次不能用完一瓶，建议您将血清无菌分装到合适的灭菌容器中，然后放回冷冻。解冻血清的方法：建议你把血清从冰箱里取出来，先放在2~8℃冰箱使之融化，然后在室温下使之完全融化。但是，须注意的是，在融化过程中务必有规律地均匀摇晃。血清解冻后发现絮状沉淀物出现，该怎么办？血清中沉淀物的原因有很多，但zui的常见原因是血清中脂蛋白的变性，血纤维蛋白(凝血蛋白之一)在血清解冻后也存在于血清中，这也是沉淀物的主要原因之一。然而，这些絮状沉淀物不影响血清本身的质量。如果你想去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装在无菌离心管内，400g稍微离心一点，上清液可以加入培养基一起过滤。我们不建议你通过过滤来去除这些絮状沉淀物，因为它们可能会阻塞你的过滤膜。为什麽要热灭活血清？加热可以灭活补充系统。激活补充剂参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。建议在免疫学研究中使用热灭活血清，培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞。有必要做热灭活吗？实验表明，对于大多数细胞来说，正确处理后的热灭活血清是不必要的。经过这种处理的血清只能稍微促进细胞的生长，或者完全没有效果，甚至血清质量通常受到高温处理的影响，导致细胞生长速度降低。

根据注入细菌或病毒的不同，以及注射到不同种类的动物体内，得到不同免疫性能的抗病毒血清。根据市场调研，现在市场上动物血清大致分为以下几类血清：猪抗病毒血清：猪瘟血清，猪蓝耳血清，猪圆环病毒血清，猪伪狂犬血清，猪细小病毒血清，猪口蹄疫血清，猪流感血清等。禽抗病毒血清:小鹅瘟血清，鸭肝抗体血清，鸭浆膜炎血清，禽流感血清，新城疫血清等牛抗病毒血清：牛口蹄疫血清，奶牛乳房炎血清，牛流行热血清，牛病毒性腹泻血清，牛出血性败血症血清等羊抗病毒血清：羊痘血清，羊口蹄疫血清，羊小反刍兽疫血清，羊快疫血清，羊肠毒血症血清，羊猝疽血清，羊黑疫血清等犬抗病毒血清：犬狂犬病血清、犬瘟热血清、犬副流感血清、犬腺病毒血清与犬细小病毒病高免血清，狐貉水貂的伪狂犬血清、细小病毒血清、乙脑血清等血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清，动物血清还可起到酸碱度缓冲液的作用.

微生物菌肥是近年来出现的一种新型生物“肥料”。虽然它被称为菌肥，但它的本质不是肥料，而是一些对土壤和农作物有益的有益菌，由一些工厂培养。菌肥分类1、菌肥具有固氮作用：包括根瘤菌、固氮菌、固氮蓝藻等；2、分解土壤有机物的菌肥：包括有机磷细菌和复合菌等；3、在土壤中分解难溶性矿物的菌肥：包括硅酸盐细菌、无机磷细菌等；4、促进作物利用土壤养分的菌肥：包括菌根菌等；5、抗病性和刺激作物生长的菌肥：包括抗生菌、增产菌等。菌肥优势三种以上复合细菌相互促进和补充，抗土传病害的作用远远大于单一细菌。有益菌群相互协作，共同作用，可以使作物达到高产高产的效果。1、增加作物产量2、改善作物质量3、提高农作物的抗逆性4、提高化肥利用率5、改善土壤环境微生物肥料是一种活性肥料，其作用主要取决于其中含有大量有益微生物的生命活动。只有当这些有益微生物繁殖代谢旺盛时，才能不断形成物质转化和有益代谢产物。因此，微生物肥料中有益微生物的种类和生命活动是否旺盛是其有效性的基础。